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        机构用户解决方案

        产品选择指南

        技术服务信息

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        ThruPLEX® Tag-Seq HV & ThruPLEX® Tag-Seq HV PLUS Kit
        品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格(元) 说明书 数量
        Clontech R400784 ThruPLEX® Tag-Seq HV PLUS Kit 24 Rxns 询价
        Clontech R400785 ThruPLEX® Tag-Seq HV PLUS Kit 96 Rxns 询价
        Clontech R400742 ThruPLEX® Tag-Seq HV 24 Rxns 询价
        Clontech R400743 ThruPLEX® Tag-Seq HV 96 Rxns 询价
        Clontech R400735 ThruPLEX® Tag-Seq HV Core Components 96 Rxns 询价
        Clontech R400734 ThruPLEX® Tag-Seq HV Core Components 24 Rxns 询价
        Clontech R400739 ThruPLEX® HV UDI 1-24 24 Rxns 询价
        Clontech R400738 ThruPLEX® HV UDI Set A 96 Rxns 询价
         
        高起始量带分子标签的DNA-Seq分析
        ThruPLEX® Tag-Seq HV & ThruPLEX® Tag-Seq HV PLUS Kit
        · 更可靠的DNA-Seq分析:文库中整合了离散且均衡的分子标签(UMIs),提供更可靠的数据表现!
        · 兼容更高起始量的多种样本:5至200 ng FFPE DNA、cfDNA起始,30 μl建库体积,无需浓缩样本!
        · 删繁就简:单管三步操作流程,2 h内完成Illumina文库构建!
        · 一致高效:无畏起始量差异,高实验重复性、更均一的文库覆盖度,高GC含量区域偏差更??!
        · 更适合于稀有突变分析,减少扩增误差及测序错误!
        · ThruPLEX® Tag-Seq HV PLUS Kit包含酶切片段步骤,提供完整文库构建流程!
         
        ThruPLEX®Tag-Seq HV产品说明
        目前,将NGS用于正确检测低频突变的关注度逐渐上升。各领域科研人员正在突破稀有突变检测灵敏度与特异性的瓶颈,而这些问题主要是由样品准备、扩增偏差及测序错误所引起的。而向Illumina文库添加特有的分子标签(Unique Molecular Identifiers, UMIs)与特有的双端index(Unique Dual Indexes, UDIs),能有效改善稀有突变检测的准确性。出于文库制备与测序质量直接相关的考虑,我们特别优化推出了接头上带UMIs及整合UDIs的全新产品——ThruPLEX Tag-Seq HV试剂盒。该产品保留了单管流程、操作简便的特点,支持5至200 ng input DNA起始用于稀有变异分析!
         
        正确的样本数据回溯、更小的手动操作误差,科研人员再不用担心珍贵样本损失了!
         
        ■ 来自UMIs的“助攻”
        ThruPLEX Tag-Seq HV在茎环形接头上引入了离散的UMIs,文库中每个DNA分子有144种可能的标签组合,汉明间距超过6,具有高度的差异性。我们特别设计了UMI序列,以使序列颜色分布达到平衡,在Illumina平台上能获得更好的测序数据。我们也谨慎调整了各UMI接头的浓度,以使144种序列组合在各种DNA起始量都能均匀展现,减少偏差。
        由7位碱基所组成的UMIs位于reads的开始位置,能够”Tag”到DNA模板上,用于识别一致序列,减少扩增或者测序错误带来的假阳性突变。
        这种特别优化的UMIs设计,确保了更简便的样本demultiplexing过程,分析更容易!
         
        ■ “抓住”游离DNA,“揪出”稀有突变
        游离DNA(cfDNA)是由细胞凋亡后所释放,游离于体液中的DNA片段。对cfDNA的测序分析具有较大难度,特别是涉及肿瘤学研究中的稀有突变分析时。
        Takara科学家采用ThruPLEX Tag-Seq HV对10 ng起始的Quan-Plex Patient-Like ctDNA标准品(AccuRef)构建文库,该ctDNA(循环肿瘤DNA)标准品带有一系列特征化的不同频率(0%,1%,5%)突变位点。文库构建完成后,肿瘤相关的基因采用IDT xGEN Pan Cancer Panel进行捕获富集。结果显示,目标区域的捕获高效可靠,10 ng起始的DNA样本约有79%的reads来自或者接近目标区域。
         
        上表数据显示,由坐标法或UMIs去除重复reads后的目标区域平均覆盖度是相似的,与Picard MarkedDuplicates所报道的PCR duplication结果一致。
        随后,Takara科学家用UMIs鉴定了ctDNA标准品中特定位点的实际突变频率,结果显示,检测到的突变频率分别与预期1%、5%的等位突变频率接近,而阴性对照组没有在位点处检测到任何突变。
         
        如果采用未去重的文件或仅用坐标法去重的文件,会检测出大量的超过0.5%等位基因频率的不一致突变。而UMIs引入、校正后,相应突变体的数量变少了,结果的正确性进一步提升,显示出UMIs在降低扩增及测序错误上的重要作用。
         
        更具代表性的是,使用未去重或者仅用坐标法去重的文件分析,在预期的EGFR L858R突变附近观察到大量的低频及随机等位基因频率突变。而用UMI校正、过滤后的一致性序列reads,清除了假阳性突变,得到了预期的突变分析结果!
         
         
        ThruPLEX®Tag-Seq HV PLUS Kit产品说明
        ThruPLEX Tag-Seq HV PLUS Kit是在ThruPLEX Tag-Seq HV的基础上,整合了ThruPLEX HV PLUS Enzymatic Fragmentation Module的完整文库构建试剂盒。ThruPLEX Tag-Seq HV PLUS Kit保留了ThruPLEX HV的显著功能,并且无需在文库制备之前进行任何机械打断或单独的酶切片段化处理,从而实现了性能和速度的充分结合!
         
        ThruPLEX Tag-Seq HV PLUS Kit流程概要
         
         
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        更多实验数据:
        ThruPLEX Tag-seq HV
         
         
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